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QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可對多種RNA模板進(jìn)行簡單、靈敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有為逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)特別設(shè)計(jì)的酶。du特組合的Omniscript和Sensiscrip逆轉(zhuǎn)錄酶對RNA模板有高度親和性，確保RNA逆轉(zhuǎn)錄的靈敏度達(dá)到1 pg到2 µg。逆轉(zhuǎn)錄完成后，升溫至95°C，15分鐘，活化HotStarTaq DNA Polymerase同時(shí)使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。這種方法可減少引物二聚體等非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的生成，并減少背景的影響，確保RT-PCR的高靈敏度和可重復(fù)性（參見Highly specific RT-PCR using low amounts of template 和 Efficient detection of viral RNA）。

退火溫度范圍寬

引物的退火溫度取決于堿基對的組成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的濃度和反應(yīng)的離子環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K⁺和NH₄⁺，使用該緩沖液可在很寬的溫度范圍內(nèi)增加特異性PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量（參見Increased specific primer annealing）。其原理是破壞非特異性結(jié)合的引物對，提供更加可靠的反應(yīng)環(huán)境，減少繁瑣的溫度優(yōu)化過程。相反，如使用僅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR緩沖液，PCR退火溫度的范圍較窄，可靠性較差，參見Influence of annealing temperature on specificity。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer專為提高逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的效率而設(shè)計(jì)。該緩沖液含有新型輔助劑，可防止逆轉(zhuǎn)錄酶對PCR擴(kuò)增的抑制，而這是一步式RT-PCR中常見的問題。該緩沖液確保在較大的溫度范圍和Mg²⁺濃度范圍內(nèi)，引物與模板特異性結(jié)合，可對多種RNA模板進(jìn)行高效的RT-PCR擴(kuò)增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，這是可修飾核酸熔解行為的新型輔助劑。Q-Solution可促進(jìn)高GC含量或含較多二級結(jié)構(gòu)的模板的逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增（參見RT-PCR of GC-rich template）。 使用Q-Solution可簡化復(fù)雜模板RT-PCR的優(yōu)化過程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有試劑，可進(jìn)行快速、簡便的RT-PCR，用于多種靈敏的應(yīng)用（見表）。

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、簡單的進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)體系構(gòu)建。無論是何種應(yīng)用，即無論是病毒檢測、分子診斷研究還是基因表達(dá)，您只需將所有試劑在一個(gè)離心管中混合即可開始PCR擴(kuò)增（參見OneStep RT-PCR procedure）。反應(yīng)混合液含有逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)所需的所有試劑，無需添加其他試劑即可開始反應(yīng)（參見下表）。

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit適用于RT-PCR分析，包括：

• 病毒檢測

• 單細(xì)胞RT-PCR

• 基因表達(dá)分析